Правила работы в вирусологической лаборатории

.

Боксы и предбоксники, кроме ежедневной влажной дезинфекционной обработки, необходимо облучать бактерицидными лампами в течение 30-40 мин перед началом и после работы. В предбокснике можно проводить вспомогательные работы: фильтровать сыворотки, солевые растворы, проводить трипсинизацию тканей и т.д. Для этого пользуются фильтрами Зейтца с электрическими вакуумными насосами, гомогенизаторами, газовыми горелками, розетками для подключения приборов в электросеть и т.д.

В боксе, кроме рабочих столов и стульев, должно быть все необходимое для работы: стерилизаторы для инструментов, банки с дезрастворами для отработанных пипеток, бак с дезраствором для сбора отработанных материалов, баночки со спиртом, йодом, штативы для пробирок, пробирки с бульоном для проверки бактериального загрязнения, стерильные пипетки, ступки и т.д.

Потолок и стены лабораторных комнат покрывают масляной краской (стены на 1,5 м от пола можно выложить кафельными плитками), пол — линолеумом или кафельными плитками. Рабочие столы в боксах должны быть покрыты стеклом или оцинкованной жестью.

ГЛАВА 1. ВИРУСОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАНЯТИЕ 1. Правила работы в вирусологической лаборатории

Цель занятия: ознакомиться с планировкой и оборудованием вирусологической лаборатории, ее документацией, правилами и техникой безопасности при работе с вируссодержащим материалом.

Оборудование и материалы: помещение вирусологической лаборатории, подготовленное в соответствии с установленными правилами и нормами, электронный и люминесцентный микроскопы, центрифуги, журнал регистрации студентов, получивших инструктаж по технике безопасности при работе в вирусологической лаборатории, документация лаборатории.

Краткие теоретические сведения

Вирусологическая лаборатория (рис.1) предназначена для проведения диагностических исследований на вирусные инфекции, контроля состояния и напряженности специфического противовирусного иммунитета и участия в организации и проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными заболеваниями.

Современные вирусологические лаборатории, независимо от специализации, должны размещаться в чистых светлых помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Их следует изолировать от других лабораторий (бактериологических, биохимических и прочих). Независимо от характера выполняемой работы в них необходимо поддерживать идеальную чистоту. Кроме ежедневной обычной уборки, помещения периодически обрабатывают растворами дезинфицирующих веществ (карболовой кислоты, лизола, хлорной извести, хлорамина и т.п.) и подвергают ультрафиолетовому облучению. Комнаты, предназначенные для работы с вирусами, должны быть хорошо освещены и состоять из двух отделений, разобщенных стеклянной перегородкой: предбоксника и бокса. В боксах, организованных по типу операционных, над рабочим столом на расстоянии 50-70 см от поверхности устанавливают бактерицидные лампы БУВ-15, БУВ-30 или БУВ-60 для уничтожения спороносных бактерий и микроскопических грибов. Для облучения гомогенизаторов в боксе желательно иметь передвижную кварцевую лампу ПРК-4. У входа в бокс должен лежать половичек, пропитанный дезраствором (дезподушка). В предбокс-нике в биксах должны быть стерильные халаты, шапочки, маски, которые одевают перед работой.

Лаборатория должна иметь 5-6 комнат, отдельный вход для сотрудников и для посетителей с тамбуром, обязателен гардероб и душевая.

Для регистрации поступающего на исследование патологического материала предназначена приемная. Пол в ней должен быть бетонный, стены покрыты масляной краской или керамической плиткой, окна заделаны железными решетками. При входе необходимо положить войлочный коврик, пропитанный дезинфицирующим раствором. В приемной размещают несколько столов, обитых оцинкованной жестью, бак с дезинфицирующим раствором (чаще всего с 5%-ным раствором фенола).

В комнате для предварительной обработки материала проводят, вскрытие трупов и отбор материала для дальнейшего исследования. В ней должны быть бокс с предбоксником, соединенный окном с виварием для инфицированных животных. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки — отпечатки и т.д. В комнате также должны быть столы для вскрытия трупов и обработки материала. На столе для вскрытия трупов помещают инструментарий (ножницы, пинцеты, скальпели, корнцанги), эмалированный тазик, сосуды с дезинфицирующими растворами, стерильную посуду для сбора материала.

Комнату для вирусологических исследований оборудуют двумя боксами для получения культур клеток и работы с вирус -содержащим материалом, столами (число их зависит от количества работающих), термостатами, холодильниками, центрифугами, торсионными и аналитическими весами, электроплитками, фильтрами, насосами, водяными банями, электромагнитными мешалками. Лабораторию снабжают в достаточном количестве биксами, фильтрами Зейтца, ящиками для хранения сред, эмалированной и стеклянной посудой — матрацами, флаконами, колбами разных объемов, градуированными пипетками, микропипетками; цилиндрами и стаканами, пробирками серологическими, бактериологическими и центрифужными, ампулами и резиновыми пробками разных размеров, металлическими штативами для пробирок, карандашами по стеклу, фильтровальной бумагой, лейкопластырем и т.д.

На столах для определенных операций за каждым работающим закрепляют рабочее место. Здесь размещают нужную аппаратуру, соответствующие дезинфицирующие средства, краски, реактивы. На операционном столе необходимы микроскоп, набор инструментов (пинцеты, ножницы, скальпели и др.), вата, пастеровские пипетки, стерильные и обезжиренные покровные и предметные стекла, физраствор. При работе с куриными эмбрионами должны быть подставки для яиц, овоскопы, инструменты для вскрытия (ножницы, глазные пинцеты).

Комнаты-боксы, предназначенные для работы с вирусами, должны быть хорошо освещены и иметь два отделения, разобщенные стеклянной перегородкой: предбоксник и бокс. В боксе устанавливают бактерицидные лампы. У входа в бокс должен лежать войлочный коврик, пропитанный дезинфицирующим раствором. В предбокснике должны быть стерильные халаты, тапочки, маски, которые надевают перед работой.

В автоклавной стерилизуют посуду, питательные среды, аппаратуру и приборы, обезвреживают заразный материал. Необходимо иметь два автоклава, для чистых материалов и для инфицированных, бак для сбора инфицированного материала, сушильные шкафы, дистилляторы, столы и шкафы для стерильной посуды.

Моечная предназначена для мытья посуды, аппаратуры и приборов. В ней должна быть машина для посуды и белья, сушильные шкафы и т.д. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации.

Помещение, используемое для выращивания и содержания лабораторных животных, называется виварием. В правильно организованном виварии имеется карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухня для приготовления пищи, кладовая, фуражная, трупосжигательная печь и др. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга и иметь самостоятельные входы с дезковриками. Кроме того, они должны быть непроницаемыми для грызунов и различных насекомых. Виварий должен быть теплым, светлым (с источником дневного света) и сухим. В холодное время года здесь поддерживают температуру 12-20 °С.

Лабораторных животных содержат в клетках. В одной клетке может быть 1-2 кролика, 5-6 морских свинок, 8-10 крыс, 15-20 мышей. На каждой клетке с животными вывешивают паспорт, где отмечают дату их поступления в виварий, массу, в паспорте на клетках с подопытными животными дополнительно отмечают дату заражения и вид вируссодержащего материала.

Чистку клеток и вивария делают ежедневно, используя мыльно-карболовый раствор. После уборки тщательно моют руки и обрабатывают их 2%-ным раствором хлорамина.

Сотрудники вирусологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила, предупреждающие попадание бактерий и плесневых грибов в исследуемый материал и возможность внут-рилабораторных заражений персонале и распространения инфекции.

1. Работать разрешается в специальной одежде — халате и шапочке. При работе с особо опасным материалом дополнительно одевают резиновые перчатки, марлевую маску и защитные очки. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь. В виварии во время мытья посуды и уборки на халат надевают передники, а на ноги — резиновые сапоги.

2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат.

3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

4. Не допускаются хождение, разговоры во время работы.

5. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен рассматриваться как инфицированный.

6. При распаковке материала необходимо соблюдать осторожность. Банки следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на подносы или кюветы.

7. Переливание жидкостей, содержащих вирусы, производят над сосудом, наполненным дезраствором.

8. В случае попадания заразного материала на халат, руки, стол, обувь и т.д. надо сообщить об этом заведующему лабораторией (в учебных заведениях — преподавателю) и немедленно произвести под его контролем дезинфекцию. При подозрении на заражение необходимо обратиться к врачу.

9. Зараженный материал подлежит обязательному уничтожению (автоклавирование, сжигание), по возможности в тот же день. Инструменты, а также поверхность рабочего стола после работы сразу же дезинфицируют.

10. При работе с пипетками для разлива жидкого инфицированного материала пользуются резиновыми баллончиками (грушами) небольшого объема.

11. В журнале регистрации ежедневно делают записи относительно использованного заразного материала и его уничтожения.

12. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы и т.д. без предварительной дезинфекции их на месте.

13. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую* посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в 5%-ный раствор лизола, фенола или серной кислоты, которые всегда должны быть на столах.

14. Запрещается оставлять на рабочих столах бактериологические чашки, пробирки и другую посуду с заразным материалом.

15. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Вируссодержащий материал, необходимый для дальнейшей работы, ставят на хранение в сейф-холодильник и опечатывают. Руки тщательно дезинфицируют мыльным спиртом, 70°-ным спиртом и др.). Лабораторию закрывают и опечатывают.

Учреждения, где систематически проводят работы с патогенными вирусами, должны иметь коллекции их штаммов, которые хранят в музее живых культур. Музейные культуры используют в качестве эталонов для диагностических целей.

Для всех вирусологических лабораторий установлен единый порядок обращения о вирусами, предусматривающий правила их хранения, регистрации, передачи от одного сотрудника другому внутри лаборатории и за ее пределы.

Культуру вирусов хранят в холодильнике -(20...70 °С) под замком с пломбой или печатью. Все пробирки и пенициллиновые флаконы, закрытые резиновыми пробками, должны иметь этикетки из лейкопластыря с указанием вида вирусов, индивидуального номера штамма и стабилизирующей среды, в которой он находится. Лучшим способом сохранения вирусов является лиофил изация.

В вирусологической лаборатории должна быть следующая документация.

1. Инвентарная книга музейных штаммов вирусов.

2. Журнал учета движения вируссодержащего материала в лаборатории.

3. Журнал учета стерилизации и уничтожения инфицированного материала.

4. Журнал учета зараженных подопытных животных.

5. Журнал вирусологических исследований (экспертиз).

6. Журнал учета выделяемых вирусов.

В ходе самостоятельной работы студентов необходимо

1. Ознакомиться с вирусологической лабораторией кафедры и ее основным оборудованием.

2. Изучить документы лаборатории.

Примерный план занятия (2 ч)

1. Объяснение преподавателя.

2. Запись в тетради требований при работе с вирусным материалом и основных правил выполнения этих требований.

3. Роспись в журнале по технике безопасности.

4. Демонстрация: а) лаборатории и ее основного оборудования; б) организации рабочего места в боксе при работе с вирусами. Ознакомление с документацией лаборатории.

5. Самостоятельная работа студентов.

6. Подведение итогов.

7. Задание к следующему занятию.

Методические указания

Занятие можно организовать следующим образом. После объяснения преподавателя и демонстрации (см. п.4 занятий) студенты должны подготовить рабочее место для работы с вирусным материалом. Для этого они проводят его дезинфекцию раствором хлорамина, ставят на стол сосуд с 2%-ным дезраствором, контейнер для отходов, спиртовку, баночку со стерильной ватой, готовят инструменты (шприц, иглы, пинцет) для стерилизации. Отрабатывают приемы работы с пипеткой и грушей.

Для ознакомления с документацией лаборатории можно использовать ветеринарное законодательство, инструкции о правилах работы в лабораториях.

to

Вопросы домашнего задания

1. Открытие вирусов и периоды развития вирусологии. Прпдмот и задачи вирусологии.

2. Взятие, пересылка и сохранение вируссодержащего материала.

3. Подготовка вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культуры клеток.

ЗАНЯТИЕ 2. Подготовка вируссодержащего материала для заражения чувствительных объектов

Цель занятия: ознакомиться с техникой взятия, транспортировки, сохранения и подготовки вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культуры клеток.

Оборудование и материалы: пенициллиновые флаконы с кусочками паренхиматозных органов, залитых раствором Хенкса и замороженных, стерильные фарфоровые ступки с пестиками, стерильный стеклянный песок, стерильные чашки Петри (по две на рабочее место), стерильные центрифужные пробирки (количество их должно соответствовать числу рабочих мест), раствор Хенкса, пенициллин и стрептомицин, МПА, МПБ в пробирках на каждое рабочее место, стерильные пенициллиновые флаконы, стерильные резиновые пробки №14 или 14,5, ножницы, пинцеты, спиртовки, центрифуга, бумажные фильтры, таблицы по теме. Краткие теоретические сведения

Вирусологическое исследование сводится к выделению вируса из патматериала, его серологической идентификации и подробному изучению различных свойств (патогенность, антигецность, культивируемость в лабораторных условиях, морфологические признаки).